重組蛋白簡單的說就是是人工合成蛋白。在知道編碼該蛋白的基因序列之后，人工克隆該基因進入質粒。然后再把質粒轉染如大腸桿菌。這樣大腸桿菌就成了蛋白表達的工廠。表達出來的蛋白再進過分離純化，就是重組蛋白。目前重組蛋白在制藥工業上主要是指表達獲得的細胞因子、凝血因子或者人工設計的蛋白分子。
研究重組蛋白的作用時要先做體外實驗，再做體內實驗。知道大致是哪方面的功能，否則就是瞎撞了?？梢詮闹亟M前的蛋白的功能中尋找方向，如果什么都不知道就在細胞中加點重組蛋白，先做個MTT看看細胞死活，確定有沒有功能。
以大腸桿菌為例介紹一下重組蛋白質的提取步驟。
(1) 大腸桿菌的酶解：
1) 4℃ 、1000g離心15 min收集細菌細胞，倒去上清液，將濕細菌稱重。
2) 每克細菌細胞中加入約3 ml溶菌酶緩沖液（50mmol/L Tris·HCl，pH 8. 0；lmmol/L EDTA；50mmo1/L NaCl; lmmol/L PMSF)，渦旋，使菌體完全懸浮，加入溶菌酶，終濃度至0. 3mg/ml，于4℃攪拌30min。
3）攪拌下加入脫氧膽酸鹽，終濃度至1 mg/ml。
4）加入核酸酶，終濃度至10mg/ml，攪拌下室溫作用15 min。
5) 4℃、10000g離心15 min，分別收集上清液和沉淀，進行SDS-PAGE，確定目標蛋白質存在于哪個組分中，如果目標蛋白質位于沉淀中，則重組蛋白是以包涵體的形式存在。
(2）包涵體的清洗：
1) 將破菌后的沉淀重懸于適當的緩沖液中，渦旋混合5 min，離心收集沉淀。
2）將上述沉淀重懸于1％的Triton X-100中，渦旋混合5 min，離心收集沉淀。
3) 將上述沉淀重懸于4mol/L的尿素或鹽酸肌中，渦旋混合5 min，離心收集沉淀。
4）將破菌后的沉淀重懸于適當的緩沖液中，渦旋混合5 min，離心收集沉淀。
根據清洗的情況，可以適當地增加2)、3)步的洗滌次數。
(3) 從包涵體中溶解重組蛋白：在溶解包涵體時，可以選用2％的SDS、8mol/L的尿素或8mol/L的鹽酸肌等裂解液，根據蛋白質的特性、實驗的要求進行選擇，并進行優化。下面以8 mol/L鹽酸肌為例，溶解包涵體中的重組蛋白質。
1）用裂解液（50mmo1/L Tris·HCl, pH 8.0, 8mo1/L鹽酸胍，1mmol/L DTT）重懸清洗后的包涵體，如果重懸困難，可適當地進行超聲處理，然后在室溫下作用lh，并不時地渦旋混合。
2) 4℃、20000g離心30min，除去不溶性物質，保留上清。
提取方法：
一．固液萃取
在固液萃取中，提取物是由固相轉為液相，或由細胞內轉為細胞外，其提取效率與物質的擴散作用有關。
為了增加擴散物質的量，也就是提高提取速度，常采用如下措施：
1）提高材料的破碎程度，以增加擴散面積，減少擴散距離；
2）進行攪拌，使已擴散的溶質迅速與溶劑混勻，以保持兩項界面最大濃度差，或分多次提取，不斷更換新鮮溶劑，以提高擴散速率；
3）延長提取時間，提高提取溫度，以及減少溶液粘度（如屬大分子核酸干擾，加入少量魚精蛋白或硫酸鏈霉素沉淀除去）等。
實際上從破碎后的固體細胞提取所需組分，當細胞破碎程度及提取溫度受到限制時，采用少量多次提取方法較為有利。
二．液液萃取
液液萃取選用的溶劑必須與被抽提的溶液互不混合、且對被抽提的溶質有選擇性的溶解能力。最常用的液液萃取溶劑為二相溶劑，水或水-醇為一相，與水互不相溶的各種碳氫化合物，如低級醚、酯、苯酚等，為另外一相。
提取一些具有生理活性的物質時，除了考慮被提取物溶解度外，還應考慮被提取物活性的保護。對于一些生物大分子如蛋白質、酶和核酸來說，主要措施有如下幾點；
1．采用緩沖系統 防止提取過程中某些酸堿基團的解離，造成溶液中PH值變化幅度過大，導致某些活性物質的變性、或由于PH變化影響提取的效果。在生化制備中，提取中常用的緩沖系統有磷酸鹽緩沖液、檸檬酸緩沖液、Tris緩沖液、醋酸鹽緩沖液、碳酸鹽緩沖液和巴比妥緩沖液等。
[緩沖液] 分為非-雙性離子緩沖化合物類和雙性離子緩沖化合物類。前者包括HCl-KCl、甘氨酸-HCl、烏頭酸鹽-NaOH、檸檬酸鹽-磷酸鹽、檸檬酸鹽-NAOH、醋酸鹽、琥珀酸鹽、順丁烯二酸鹽-NAOH、磷酸鹽、TRIS-HCL、硼酸-硼砂、甘氨酸-NAOH、碳酸鹽-碳酸氫鹽等，存在反應性和緩沖能力有限等缺點。雙性離子緩沖液雖然具有很多優點，但依然存在反應性與不適應性的問題，如HEPEs是氨基丁酸的拮抗性（反應性）、不適應于所有的組織培養（不適應性）。
2．加入保護劑 防止某些生物活性物質的活性基團及酶的活性中心受到破壞。如最常見的巰基，是許多活性物質和酶催化的活性基團，極易被氧化，故提取時常加入一些還原劑。一些易受重金屬離子抑制生理活性的物質，加入某些金屬螯合劑，把有害金屬離子螯和掉，而保持被提取物的活性。 [螯合劑和巰基試劑] 巰基試劑在生化反應中有兩個用途，一是防止蛋白質或酶等分子中的SH-基氧化成S-S，二是某些酶反應中維持體系的還原環境。經常應用的巰基試劑有二硫丁醇類化合物（如二硫蘇糖醇DTT、二硫赤酰糖醇DTE）和2-巰基乙醇，谷胱甘肽也經常應用。一般來說二硫丁醇類是常選用的巰基試劑，不僅是因為揮發性低，難聞的氣味較少，而且氧化電位低，比2-巰基乙醇濃度低很多的情況下，可以使其他二硫化合物完全還原。螯合劑用于控制反應中金屬離子濃度或去除金屬離子，常用的螯合劑有EDTA（乙二胺四乙酸）、EGTA、1,10-二氮雜菲、檸檬酸和磷酸等。
3．抑制水解酶的破壞 根據不同水解酶的性質采用不同方法。如需要金屬離子激活的水解酶，常加入EDTA或用檸檬酸緩沖液除去溶液中的某些金屬離子，使酶的活性受到抑制；對熱不穩定的水解酶，可以用熱提取法使之失去作用；或選用PH范圍，使酶活性最低；還可針對性地加入某些抑制劑，以抑制水解酶的活性，但此類方法在蛋白提取中應用較少。
4．其它一些特殊要求的保護措施 除避免紫外線、強烈攪拌、過酸過堿、高溫、凍結等情況外，有些蛋白質在提取時還有特殊要求，如固氮酶鉬-鐵蛋白，必須在無氧條件下進行。
重組蛋白的分離純化有：1、沉淀分離技術（鹽析法、有機溶劑沉淀法、等電點沉淀法、變性沉淀法） 2、液液萃取技術 3、層析法（離子交換層析、疏水層析、反相層析、親和層析）
重組蛋白分離純化技術近幾年發展迅速，今后重組蛋白的分離純化技術的發展將圍繞著快速、高分辨率。高上樣量、易于操作、低成本和電腦控制的全自動化等技術面展開。希望今后能有更多更好的方法來提純蛋白吧~